為什么要進(jìn)一步優(yōu)化重度抑郁癥基因檢測位點(diǎn)？

抑郁癥因其高發(fā)病率及其對個體和群體的影響，在臨床和臨床前心理神經(jīng)生物學(xué)領(lǐng)域備受關(guān)注。鑒定有效的生物標(biāo)志物以實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確診斷至關(guān)重要，理想的生物標(biāo)志物應(yīng)具有可檢測的血清水平以及構(gòu)象和熱穩(wěn)定性。佳學(xué)基因解碼旨在鑒定穩(wěn)定的血漿生物標(biāo)志物，用于重度抑郁癥的診斷和預(yù)后。 如查不清楚該疾病的發(fā)病機(jī)制，會影響診斷的準(zhǔn)確性。重度抑郁基因解碼納入了10名重度抑郁癥患者和8名健康對照者。分析了重度抑郁癥患者與健康對照者的miRNA。結(jié)果：11種特異性miRNA，特別是hsa-miR-874-3p、hsa-let-7d-5p和hsa-miR-93-3p，在重度抑郁癥患者組中表現(xiàn)出上調(diào)型血漿變異。miRNA的功能與抑郁癥的病理生理學(xué)相關(guān)。佳學(xué)基因通過基因解碼確定了重度抑郁癥患者中具有顯著上調(diào)變異的“一束” miRNA，未來會進(jìn)一步研究確定它們是否適合個性化和評估，最終成為重度抑郁癥血清學(xué)評估的組成部分。

《鑒定血漿中特定 miRNA 作為重度抑郁癥的基因檢測靶標(biāo)》關(guān)鍵詞：

重度抑郁癥，miRNA，重度抑郁癥生物標(biāo)志物，hsa-miR-874-3p，hsa-let-7d-5p，hsa-miR-93-3p

《人體基因序列變化與疾病表征》對重抑郁癥的介紹

1.1. 重度抑郁癥（MDD）

由于抑郁癥患病率高，且在個體和群體層面均有顯著差異，因此一直是臨床和臨床前心理神經(jīng)生物學(xué)（生物化學(xué)、藥理學(xué)、病理生理學(xué)、形態(tài)病理學(xué)、精神病學(xué)、神經(jīng)病學(xué)）領(lǐng)域?qū)ｉT研究的重點(diǎn)。抑郁癥是一種復(fù)雜的精神健康障礙，其病因復(fù)雜，涵蓋遺傳、環(huán)境和神經(jīng)生物學(xué)因素。

從歷史角度來看，抑郁癥最初被稱為憂郁癥（melancholia）。憂郁癥的診斷始于19世紀(jì)初，直至19世紀(jì)80年代，這促成了現(xiàn)代抑郁癥概念的發(fā)展。十二位強(qiáng)調(diào)心理學(xué)能力和洞察力作用的作者的著作追溯了這一概念的發(fā)展。

1880 年代至 19 世紀(jì) 30 年代之間，五位科學(xué)家將憂郁癥定義為一種常與抑郁癥有關(guān)的精神疾病或缺陷。19 世紀(jì) 50 年代，Guislain、Bucknill 和 Tuke 強(qiáng)調(diào)不伴有妄想的憂郁癥是一種被忽視的疾病。到了 19 世紀(jì) 60 年代和 80 年代，五位科學(xué)家得出結(jié)論，憂郁癥是一種原發(fā)性心境障礙，譫妄癥是異常心境自然導(dǎo)致的。憂郁癥的概念包括各種形式的安靜性精神錯亂，而抑郁癥在 19 世紀(jì)被更明確地定義為情感障礙。20 世紀(jì) 30 年代引入了診斷方案的標(biāo)準(zhǔn)，20 世紀(jì) 60 年代出現(xiàn)了單相情感障礙和雙相情感障礙的現(xiàn)代區(qū)別。關(guān)于精神病性抑郁癥和神經(jīng)性抑郁癥之間的區(qū)別以及內(nèi)源性抑郁癥和反應(yīng)性抑郁癥之間的區(qū)別引起了爭論。

從診斷角度來看，根據(jù)《精神障礙診斷和統(tǒng)計(jì)手冊》（DSM-5），重度抑郁癥（MDD）的特征是認(rèn)知、情感和植物神經(jīng)功能的明顯改變；從時間角度來看，其定義為發(fā)作持續(xù)至少2周。從數(shù)量角度來看，同一次發(fā)作期間必須出現(xiàn)5種或更多癥狀，其中至少有一種是抑郁狀態(tài)或快感缺乏。

臨床表現(xiàn)可能包括以下癥狀：體重顯著減輕或增加、疲勞、注意力無法集中、無價值感或內(nèi)疚感，以及反復(fù)出現(xiàn)自殺念頭。然而，由于重度抑郁癥是一種臨床異質(zhì)性疾病，實(shí)施基于癥狀的治療方法存在顯著局限性。糖尿病、癌癥以及帕金森病和阿爾茨海默病等神經(jīng)退行性疾病患者也經(jīng)常出現(xiàn)抑郁癥狀，這使得實(shí)施基于癥狀的治療方法更加困難。

DSM-5 將抑郁癥分為幾種不同的亞型。根據(jù) DSM-5，這些亞型旨在表示特定的癥狀模式或癥狀可能出現(xiàn)的時間范圍。

1.2. 重度抑郁癥的基因解碼

大規(guī)模的聯(lián)盟研究和隊(duì)列研究表明，遺傳因素在重度抑郁癥（MDD）的病因中起著重要作用。MDD的病理生理機(jī)制似乎主要受基因-環(huán)境相互作用的影響，而早期生活壓力是多種精神障礙（包括MDD）的重要風(fēng)險因素。

規(guī)模最大的抑郁癥全基因組關(guān)聯(lián)研究 (GWAS) 涵蓋超過 120 萬參與者，發(fā)現(xiàn) 223 個獨(dú)立的單核苷酸多態(tài)性 (SNP) 和 178 個遺傳風(fēng)險位點(diǎn)與重度抑郁癥 (MDD) 相關(guān)。神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育、大腦的大小以及突觸的組裝和功能是與重度抑郁癥（MDD) 約 11.3% 的 SNP 遺傳率相關(guān)的主要生物學(xué)過程。神經(jīng)生長調(diào)節(jié)因子 1 (NEGR1)、CUGBP Elav 樣家族成員 4 (CELF4) 和多巴胺 D2 受體 (DRD2) 是與重度抑郁癥（MDD) 相關(guān)的主要基因。

早期生活壓力通過表觀遺傳調(diào)控作用，導(dǎo)致下丘腦-垂體-腎上腺 (HPA) 軸持續(xù)紊亂。在重度抑郁癥 (MDD) 中起重要作用的表觀遺傳調(diào)控包括組蛋白修飾、非編碼 RNA 調(diào)控和脫氧核糖核酸 (DNA) 甲基化。

早期生活壓力會導(dǎo)致糖皮質(zhì)激素分泌增加，并破壞調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-腎上腺 (HPA) 軸活動的穩(wěn)態(tài)機(jī)制，從而增加患上壓力相關(guān)疾病的風(fēng)險，例如心境障礙、情感障礙、焦慮癥、邊緣性人格障礙 (BPD) 和創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙 (PTSD)。DNA 甲基化在將社會經(jīng)歷轉(zhuǎn)化為基因表達(dá)和表型的長期變化中起著重要作用。

糖皮質(zhì)激素受體基因 (NR3C1) 是一個高度保守的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，控制著內(nèi)分泌對應(yīng)激、代謝、炎癥和生殖的反應(yīng)。研究表明，外顯子 17 DNA 甲基化的持續(xù)性變化是母親照料的結(jié)果，而童年創(chuàng)傷、自殺、邊緣性人格障礙 (BPD) 和創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙 (PTSD) 也會產(chǎn)生類似的表觀遺傳修飾。

早期生活應(yīng)激會誘導(dǎo)核受體亞家族3C組成員1（Nr3c1）控制元件的位點(diǎn)特異性高甲基化，該元件協(xié)調(diào)促皮質(zhì)素釋放激素（CRH）表達(dá)神經(jīng)元中多種糖皮質(zhì)激素受體（GR）轉(zhuǎn)錄本和整體GR蛋白的表達(dá)，并阻止成年期慢性應(yīng)激條件下CRH的上調(diào)。這種“分子可塑性”使生物體能夠通過整合多層次的基因-環(huán)境相互作用來發(fā)起適應(yīng)性反應(yīng)。

1.3. miRNA在重度抑郁癥中的意義

自 1993 年發(fā)現(xiàn)第一個小非編碼 RNA 以來，人們對微小 RNA (miRNA) 的認(rèn)識迅速擴(kuò)展，因此最近的基因解碼越來越集中于 miRNA 在抑郁癥發(fā)病機(jī)制中的作用。

miRNA 是一類由大約 18 到 25 個核苷酸組成的小型單鏈 RNA，由 Reinhart 等人通過秀麗隱桿線蟲的發(fā)育時間控制首次發(fā)現(xiàn)。

因此，這些小的非編碼RNA分子參與基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，并在發(fā)育、分化、細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡等各種生物過程中發(fā)揮重要作用。

miRNA 調(diào)控基因表達(dá)的能力是這些復(fù)雜生物學(xué)過程的基本組成部分。由于 RISC/miRNA 復(fù)合物的獨(dú)特序列可以與目標(biāo) mRNA 的 3′ 非翻譯區(qū)結(jié)合，miRNA 通常被認(rèn)為能夠?qū)е?mRNA 的翻譯抑制或降解，并直接調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。因此， miRNA在控制和調(diào)節(jié)細(xì)胞發(fā)育和分化方面發(fā)揮著重要作用，尤其是在大腦中，它們的表達(dá)可以顯著調(diào)節(jié)神經(jīng)元發(fā)育和細(xì)胞凋亡中的細(xì)胞內(nèi)信號通路。

miRNA 是一種 DNA 聚合酶，可將基因組區(qū)域轉(zhuǎn)錄為初級 miRNA。這些初級轉(zhuǎn)錄本由微小RNA合物 Drosha 和 DGCR8 處理，產(chǎn)生 70 個核苷酸的 pre-miRNA。Exportin-5 將 pre-miRNA 輸出到細(xì)胞質(zhì)中，使其能夠通過核孔復(fù)合物運(yùn)輸。Dicer 對其進(jìn)行處理，產(chǎn)生成熟的 miRNA 雙鏈體。miRNA 是 miRNA 誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物 (miRISC) 的一部分，該復(fù)合物可抑制轉(zhuǎn)錄并介導(dǎo) mRNA 衰變。它們對細(xì)胞內(nèi)環(huán)境以外的環(huán)境（包括神經(jīng)系統(tǒng)）也有重要影響。miRNA 可以釋放到細(xì)胞外液中，在那里它們進(jìn)行全身循環(huán)以調(diào)節(jié)遠(yuǎn)處的靶細(xì)胞。它們的運(yùn)輸機(jī)制涉及外泌體，外泌體是細(xì)胞外囊泡 (EV) 的一種特殊亞型，由各種細(xì)胞類型分泌。

1.4 miRNA在重度抑郁癥中的致病機(jī)制

在抑郁癥的背景下，miRNA被認(rèn)為通過幾種機(jī)制影響該疾病的發(fā)病機(jī)制，例如調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)、神經(jīng)可塑性、應(yīng)激反應(yīng)和HPA軸調(diào)節(jié)、炎癥和神經(jīng)發(fā)生。

因此，miRNA 可以調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)相關(guān)基因的表達(dá)，例如血清素、多巴胺和谷氨酸，這些基因?qū)τ谇榫w調(diào)節(jié)至關(guān)重要，并且與抑郁癥的病理生理有關(guān)。miRNA 在調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)信號傳導(dǎo)中發(fā)揮重要且相關(guān)作用的機(jī)制如下。神經(jīng)遞質(zhì)在突觸前神經(jīng)元中合成。隨后，它們被嵌入囊泡并釋放到突觸縫中。這些囊泡將與突觸后受體相互作用，從而刺激或抑制突觸后細(xì)胞活動。從神經(jīng)遞質(zhì)合成到信號終止，該過程的每個組成部分都受到突觸蛋白活性的調(diào)節(jié)，這些蛋白可由作為 miRNA 靶標(biāo)的 mRNA 編碼，并且某些調(diào)節(jié)可以在局部發(fā)生。

下丘腦-垂體-腎上腺 (HPA) 軸在人體應(yīng)對壓力的過程中起著核心作用。HPA 軸失調(diào)與抑郁癥有關(guān)。miRNA 可以通過調(diào)節(jié)參與 HPA 軸和應(yīng)激相關(guān)信號通路的基因來影響應(yīng)激反應(yīng)。

越來越多的證據(jù)表明，炎癥可能參與抑郁癥的發(fā)病機(jī)制。miRNA 可以調(diào)節(jié)促炎和抗炎細(xì)胞因子的表達(dá)，從而可能影響與抑郁癥相關(guān)的炎癥過程。

miRNA參與神經(jīng)發(fā)生，即大腦中新神經(jīng)元產(chǎn)生的過程。神經(jīng)發(fā)生受損，尤其是海馬體的神經(jīng)發(fā)生受損，與抑郁癥有關(guān)。miRNA可能影響神經(jīng)發(fā)生，進(jìn)而影響抑郁癥的病理生理學(xué) 。

大量研究集中于 miRNA 在抑郁癥的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮關(guān)鍵作用（例如，在神經(jīng)可塑性和神經(jīng)發(fā)生中），從而導(dǎo)致臨床相關(guān)癥狀（例如，自殺行為）。

miRNA之所以受到當(dāng)今科學(xué)界的關(guān)注，是由于其具有以下特點(diǎn)：

（1）它們在各種生物體液中穩(wěn)定維持和運(yùn)輸，例如腦脊液和外周血清/血漿；

（2）所采用的檢測方法技術(shù)簡單、成本低廉；

(3)它們的表達(dá)具有組織和疾病特異性。

另一個重要因素是，文獻(xiàn)中報道了幾種 miRNA 作為重度抑郁癥的診斷或治療監(jiān)測元素，而在佳學(xué)基因解碼的基因解碼中，這些 miRNA 并沒有表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的變化。

這一次的基因解碼旨在確定用于診斷和預(yù)后重度抑郁癥的穩(wěn)定血漿生物標(biāo)志物，因?yàn)樵摷膊〉陌l(fā)病機(jī)制仍未完全了解，影響診斷的準(zhǔn)確性。

2.材料和方法

2.1. 研究樣本與設(shè)計(jì)

本次基因解碼納入了10名重度抑郁癥患者和8名健康對照者。研究對象均為基因解碼合作醫(yī)院精神病診所的患者。這些患者符合《精神障礙診斷和統(tǒng)計(jì)手冊》第四版文本修訂版（DSM-IV-TR）中重度抑郁發(fā)作的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

抽樣方法基于便利性，選取那些容易聯(lián)系且符合納入標(biāo)準(zhǔn)的患者。這種方法雖然并非隨機(jī)，但考慮到臨床情況和研究的特定人群，是合適的。

在本次基因解碼中，患者均為未接受過藥物治療的患者，這意味著他們之前未接受過任何藥物治療。這對于確保基線評估不受既往用藥影響至關(guān)重要，有助于清晰地了解患者的初始臨床狀況。

本次基因解碼遵循《赫爾辛基宣言》的倫理準(zhǔn)則進(jìn)行，該準(zhǔn)則概述了涉及人類受試者的醫(yī)學(xué)研究的倫理原則。這確保了本次基因解碼遵循最高的倫理行為標(biāo)準(zhǔn)，并將患者的安全和權(quán)利放在首位。

本次基因解碼已獲得機(jī)構(gòu)審查委員會 (IRB) 的批準(zhǔn)。IRB 的審批流程包括對研究方案進(jìn)行全面審查，以確保研究符合倫理和監(jiān)管要求。

所有參與者均簽署了知情同意書。該過程包括向患者解釋研究的目的、流程、潛在風(fēng)險及其益處。基因解碼人員向參與者保證，參與是自愿的，他們可以隨時退出，且不會對其臨床護(hù)理產(chǎn)生任何影響。

患者自愿參與本次基因解碼。研究未向患者提供任何經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償，以確保他們的參與是出于對研究的真正貢獻(xiàn)，而非金錢激勵。

納入標(biāo)準(zhǔn)如下：年齡在 18 至 65 歲之間，根據(jù) DSM-IV-TR 標(biāo)準(zhǔn)確診為重度抑郁癥（MDD)（符合條件的患者還接受了 SCID-I 羅馬尼亞研究版本的針對軸 I DSM-IV-TR 精神障礙的臨床訪談），并愿意完成知情同意。

排除標(biāo)準(zhǔn)如下：根據(jù) DSM-IV-TR 軸 I 診斷存在另一種持續(xù)性精神疾??；在研究入組前 12 個月內(nèi)接受過抗抑郁治療；在研究前 12 個月或研究期間接受過合并癥的慢性藥物治療；以及在研究期間懷孕。

所有參與本次基因解碼的受試者均接受了全身檢查，并將血液樣本送至臨床實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行全血細(xì)胞計(jì)數(shù)分析。

2.2. miRNA分析

采用靜脈穿刺將血液樣本收集到 EDTA 涂層真空采血管中，并在收集后 2 小時內(nèi)通過離心分離血漿，并儲存在 −80 °C 下直至進(jìn)一步使用。

根據(jù)佳學(xué)基因的實(shí)驗(yàn)方案，使用 miRNeasy 血清/血漿試劑盒（Qiagen-Dusseldorf Germany）提取含有 miRNA 的總 RNA，包括C. elegans miR-39 mimic spike-in 和 UniSp2、4 和 5 作為內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)化對照。

成熟 miRNA 表達(dá)通過 ABI 7900HT 系統(tǒng)（Thermo，美國馬薩諸塞州沃爾瑟姆）中的實(shí)時 PCR 確定，使用 miRCURY LNA miRNA Focus Panels（Qiagen，德國杜塞爾多夫），按照制造商的程序檢測 179 種獨(dú)特的人類 miRNA。

使用在線 QIAGEN GeneGlobe 數(shù)據(jù)分析中心（Qiagen—Dusseldorf Germany）分析實(shí)時 PCR 數(shù)據(jù)。

2.3.統(tǒng)計(jì)分析

統(tǒng)計(jì)分析、目標(biāo)預(yù)測和通路分析。

僅選取所有樣本中均有表達(dá)的miRNA進(jìn)行進(jìn)一步分析。計(jì)算兩個時間點(diǎn)（治療前后）標(biāo)準(zhǔn)化miRNA表達(dá)的變化倍數(shù)，并使用配對t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

倍數(shù)變化（2 −ΔΔCT）是測試樣本中標(biāo)準(zhǔn)化的 miRNA 表達(dá)（2 −ΔCT）除以對照樣本中標(biāo)準(zhǔn)化的 miRNA 表達(dá)（2 −ΔCT ）。

p值是根據(jù)對照組和治療組中每個基因的重復(fù) 2 −ΔCT 值的學(xué)生 t 檢驗(yàn)計(jì)算得出的，小于0.05的p值以紅色表示。

2.4. miRNA與MDD潛在通路關(guān)系的生物信息學(xué)分析及鑒定

基因解碼利用 miRTarBase 數(shù)據(jù)庫（https://mirtarbase.cuhk.edu.cn/~miRTarBase/miRTarBase_2022/php/index.php，）評估了本次基因解碼中鑒定出的與重度抑郁癥（MDD) 相關(guān)的上調(diào)倍數(shù)變化值最高的前 5 個 miR。為了更有信心，重度抑郁癥基因解碼選擇了具有 2 種或更多驗(yàn)證方法的目標(biāo)基因。選定的基因被上傳到 Erichr 網(wǎng)站 ，并使用 Reactome 和 KEGG 作為參考數(shù)據(jù)庫來選擇與重度抑郁癥（MDD) 相關(guān)的通路 。將得到的通路與重度抑郁癥（MDD) 已發(fā)表的數(shù)據(jù)關(guān)聯(lián)起來。p值小于 0.05 被認(rèn)為是顯著的。

3.結(jié)果

重度抑郁癥基因解碼分析了10名MDD患者和8名健康對照者。對照者的年齡從18歲到65歲不等，是符合條件的入選研究對象的伴侶，年齡差異在5歲以內(nèi)。

圖1表示了研究組的總體分布，顯示與正常組相比，患者組中有大量 miRNA 被上調(diào)/下調(diào)。

從一般原則到具體情況，檢測到了一組表現(xiàn)出多個統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著變化的 hsa-miRNA，其中第一組（作為初步研究）如表 1所示。

表 1.研究組中針對重度抑郁癥的一組特定 miRNA。

初步分析顯示，這些 hsa-miRNA 在患者組與對照組中表現(xiàn)出顯著的倍數(shù)調(diào)控。這些調(diào)控具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中一些已被其他基因解碼人員在文獻(xiàn)中證實(shí)。

這些 hsa-miR 表現(xiàn)出良好的倍數(shù)調(diào)節(jié)能力，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這意味著它們可以作為重度抑郁癥診斷的生物標(biāo)志物。倍數(shù)變化 (2 −ΔΔCT ) 等于測試樣本的標(biāo)準(zhǔn)化 miRNA 表達(dá)量 (2 −ΔCT ) 除以對照樣本的標(biāo)準(zhǔn)化 miRNA 表達(dá)量 (2 −ΔCT )，因此倍數(shù)調(diào)節(jié) (FR) 以生物學(xué)意義的方式表示了倍數(shù)變化的結(jié)果。

倍數(shù)變化值大于1表示正向調(diào)節(jié)或上調(diào)，F(xiàn)R等于倍數(shù)變化。在基因解碼的研究中觀察到，hsa-miR-93-3p的FR = 8.47，這使得它成為重度抑郁癥的可行標(biāo)記物。換句話說，Homorogan等人通過在患者血液樣本中進(jìn)行檢測的研究也證明了該標(biāo)記物的可行性。

就表1而言，佳學(xué)基因解碼對重度抑郁癥患者組與健康組相比，表達(dá)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異的miRNA進(jìn)行了分析。佳學(xué)基因解碼還嘗試從文獻(xiàn)中篩選出與重度抑郁癥患者組存在顯著差異的相同miRNA的研究。

以hsa-miR-874-3p為例，在佳學(xué)基因解碼的研究中，該miRNA被上調(diào)；在Suento等人的研究中，鑒于miR-874-3p可能通過抑制吲哚胺2,3-雙加氧酶1的表達(dá)，在預(yù)防脂多糖誘發(fā)的抑郁行為中發(fā)揮重要作用，hsa-miR-874-3p可作為重度抑郁癥的治療靶點(diǎn)。同時還可以觀察到，hsa-miR-874-3p顯示出統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的變化，F(xiàn)R = 19.4，是測試組中最高的上調(diào)。

下一個描述的 hsa-miRNA 是 hsa-let-7d-5p，其在重度抑郁癥患者血漿中表現(xiàn)出上調(diào)調(diào)節(jié)，F(xiàn)R = 13.45，p = 0.02。文獻(xiàn)研究表明，let-7 家族成員在人腦中高表達(dá)，并在突觸形成和神經(jīng)發(fā)生中發(fā)揮重要作用。Maffioletti 等人領(lǐng)導(dǎo)的一項(xiàng)薈萃??分析表明，hsa-let-7e-5p 表達(dá)下調(diào)與重度抑郁癥相關(guān)。

下一個元素是 hsa-miR-93-3p，在本次基因解碼中，其 FR = 8.47，p = 0.02，這使得它成為重度抑郁癥的可行標(biāo)記物。換句話說，Homorogan 等人通過在患者血液樣本中進(jìn)行測試的研究也表明了該標(biāo)記物的適用性。

因此，上文描述的 miRNA（hsa-miR-874-3p、hsa-let-7d-5p 和 hsa-miR-93-3p）以及表 1中的其他 miRNA ，例如 hsa-miR-574-3p、hsa-miR-132-3p、hsa-miR-125a-5p、hsa-miR-376a-3p 等，在研究組中均表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明其在重度抑郁癥中具有潛在的生物標(biāo)志物作用。前三個元素（hsa-miR-874-3p、hsa-let-7d-5p 和 hsa-miR-93-3p）由于 FR 值更具代表性，因?yàn)樗鼈冊谘芯拷M中具有最高值，因此它們是上調(diào)最多且最相關(guān)的。

從客觀的角度看，這些 hsa-miR 的定量變化如圖 2所示，可以明顯看出，在研究組中這些 miRNA 呈現(xiàn)出明顯的上調(diào)趨勢，這揭示了它們作為重度抑郁癥的生物標(biāo)志物、預(yù)后因素或治療靶點(diǎn)的重要性。

對本次基因解碼中發(fā)現(xiàn)的、倍數(shù)調(diào)節(jié)值最高的、最相關(guān)的上調(diào)基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析，不僅幫助佳學(xué)基因解碼將它們與當(dāng)前的MDD疾病聯(lián)系起來，還表明這些患者可能是其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病或神經(jīng)退行性疾病的候選對象。本次基因解碼結(jié)果的臨床意義可能有助于識別MDD患者亞組，這些亞組對未來罹患其他神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病具有較高的預(yù)后意義。在對每個miR進(jìn)行分析時，佳學(xué)基因解碼發(fā)現(xiàn)了高度的通路異質(zhì)性。

對于 hsa-miR-874-3p，佳學(xué)基因解碼鑒定出 62 個與重度抑郁癥重疊的靶基因。富集分析鑒定出 17 條顯著通路（p值小于 0.05，表 2），其中 7 條與文獻(xiàn)中的重度抑郁癥直接相關(guān)。針對這 7 條通路，佳學(xué)基因解碼鑒定出 11 個重疊基因，它們分別與 3 個簇相關(guān)。根據(jù)圖3 的散點(diǎn)圖 1 和表 3所示，簇 7 涵蓋了與重度抑郁癥相關(guān)的大部分神經(jīng)系統(tǒng)疾病，而簇 5 與花生四烯酸代謝通路相關(guān)，簇 1 與甲狀腺激素通路相關(guān)。

表 2.KEGG 2021 Human 的前 10 個顯著p值和 q 值表。

表 3.Hedgehog 通路是本次基因解碼中檢測到的唯一重要通路，但細(xì)胞衰老和軸突導(dǎo)向相關(guān)基因可能與重度抑郁癥有關(guān)，盡管缺乏重要性。

下一個具有較高倍數(shù)調(diào)控值的miRNA是hsa-let-7d-5p。對于它，佳學(xué)基因解碼未鑒定出與MDD相關(guān)的顯著潛在通路。

本次基因解碼鑒定出58個靶基因與hsa-miR-93-3p相關(guān)。在所有這些靶基因中，HHAT和SMURF 2與Hedgehog信號通路相關(guān)，這似乎是本次基因解碼中檢測到的唯一顯著通路（p =0.01151），對應(yīng)于Cluster 6（圖4）。盡管以下通路不顯著（p值>0.05），但細(xì)胞衰老和軸突導(dǎo)向是與重度抑郁癥相關(guān)的重要通路。

在佳學(xué)基因解碼的研究中，hsa-miR-574-3p 的調(diào)控值達(dá)到了四倍。從該 miR 中，佳學(xué)基因解碼檢測到了 25 個相關(guān)靶基因，這些靶基因顯著參與了 50 條通路。在這 50 條通路中，只有甲狀腺激素信號通路（基于 RXR α 和 EP300 靶基因）與重度抑郁癥存在重疊。值得一提的是，該通路也被發(fā)現(xiàn)對 hsa-miR-874-3p（HDAC、APT2A2 和 ESR1 靶基因，p = 0.009）具有顯著影響。

本次分析評估的最后一個 miR 是 hsa-miR-140-5p。共篩選出 87 個相關(guān)靶基因，分別對應(yīng) 28 條主要與惡性疾病相關(guān)的重要通路。目前僅發(fā)現(xiàn)催乳素分泌通路 (STAT1, ESR2, p = 0.03) 與重度抑郁癥（MDD) 發(fā)病機(jī)制相關(guān)。

4.重度抑郁癥基因檢測位點(diǎn)的行業(yè)共識標(biāo)準(zhǔn)

本次基因解碼旨在分析重度抑郁癥患者與健康對照組的一組miRNA。本次基因解碼鑒定出11個特異性miRNA（hsa-miR-874-3p、hsa-miR-574-3p、hsa-miR-451a、hsa-miR-93-3p、hsa-let-7d-5p、hsa-miR-125a-5p、hsa-miR-132-3p、hsa-miR-141-3p、hsa-miR-140-5p、hsa-miR-376a-3p和hsa-miR-423-3p），這些miRNA在重度抑郁癥患者血漿中表現(xiàn)出多種變異。

在查閱文獻(xiàn)后，佳學(xué)基因解碼發(fā)現(xiàn)了與佳學(xué)基因解碼的研究有顯著相關(guān)性的幾個因素，例如，hsa-miR-93-3p，這是一種 miRNA，在佳學(xué)基因解碼對被診斷為重度抑郁癥的患者的研究中表現(xiàn)出了顯著的變化。

類似地，Homorogan 等人的研究中，研究并強(qiáng)調(diào)了 hsa-miR-93-3p 作為重度抑郁癥診斷標(biāo)志物的作用。

hsa-miR-93-3p 由位于 7q221 染色體上的基因編碼。它與宿主微染色體維持復(fù)合體成分 7 ( MCM7 ) 基因共轉(zhuǎn)錄，并在細(xì)胞核中表達(dá)。它屬于 miRNA-106b-25 原癌基因簇，是 miRNA-17-92 簇的旁系同源物。該簇已被證明可控制與血管生成、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞分裂等關(guān)鍵生理功能相關(guān)的多種靶基因的表達(dá)。此外，Liu X. 等人的研究強(qiáng)調(diào)了 hsa-miR-93-3p 與 miR-101 一起作為診斷重度抑郁癥的生物標(biāo)志物的作用。

hsa-miR-874-3p 在佳學(xué)基因解碼患者群體中明顯高度上調(diào)，對重度抑郁癥具有重要的診斷價值。根據(jù)科學(xué)論文，已知 hsa-miR-874 位于 5q31.2 染色體上，不僅在抑郁癥中發(fā)揮重要作用，而且在惡性疾?。ǜ渭?xì)胞癌、胰腺導(dǎo)管腺癌、上皮性卵巢癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、胃癌）和非惡性疾?。ㄈ毖?a href='http://m.njxld.com/cp/fenxian/2020/24467.html' target='_blank'>心臟病、急性心肌梗死、糖尿病腎病和多囊卵巢綜合征）中也發(fā)揮重要作用。

據(jù) Zhang 等研究，miR-874 靶基因較多，通過抑制這些靶基因的表達(dá)，miR-874 參與細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、侵襲、細(xì)胞周期和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化。

miRNA let-7 (let-7) 是最早被發(fā)現(xiàn)和鑒定的 miRNA 之一，具有多種生物學(xué)作用，參與信號調(diào)制、時間調(diào)節(jié)、晶狀體再生、蛋白質(zhì)泛素化、性別認(rèn)同以及細(xì)胞增殖和分化等多種生理過程?；氐缴窠?jīng)生物學(xué)和神經(jīng)精神病學(xué)領(lǐng)域，更重要的是，let- 7家族miRNA 在整個大腦中表達(dá)，并與一系列神經(jīng)生理過程相關(guān)，包括情緒和情感行為，以及多種精神疾病，如焦慮、抑郁、精神分裂癥和可卡因成癮。

Maffioleti 等人的研究中，通過顯示 hsa-miR-let-7d-5p 在重度抑郁癥患者血漿中存在上調(diào)樣變異，強(qiáng)調(diào)了其作為重度抑郁癥診斷生物標(biāo)志物的作用。此外，Maffioleti 等人領(lǐng)導(dǎo)的這項(xiàng)研究還重點(diǎn)介紹了 hsa-let-7d 家族中其他表現(xiàn)出上調(diào)樣變異的 hsa-miRNA，例如 hsa-let-7a-5p 和 hsa-let-7f-5p 。

有多項(xiàng)專門的基因解碼描述了重度抑郁癥中 hsa-let-7 家族的變異，其中一些被強(qiáng)調(diào)為上調(diào)變異（hsa-let-7e-5p），另一些被強(qiáng)調(diào)為 hsa-let-7 家族的下調(diào)變異（hsa-let-7b-5p、let- 7c - 5p ）。

關(guān)于 miRNA 與重度抑郁癥致病機(jī)制（炎癥、HPA 軸、神經(jīng)發(fā)生、神經(jīng)可塑性、神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)節(jié)和神經(jīng)可塑性）之間的關(guān)系，值得注意的是 miRNA-let7 表現(xiàn)出一組特別重要的作用；例如，Let-7d 靶向海馬中的 D3R，Let7b 和 let7c 調(diào)節(jié) PI3k-Akt-mTOR 通路，這已由文獻(xiàn)研究證明。

另一個重要方面涉及 hsa-miR-132-3p，它是本次基因解碼組中表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異的 11 個 miRNA 之一，并且與專門研究的結(jié)果相關(guān)。Ortega 的研究表明，hsa-miR-132-3p 調(diào)節(jié)海馬 BDNF 水平，導(dǎo)致灰質(zhì)體積減少和認(rèn)知能力下降。其作用與抑郁自評量表和 HAM-D 量表相關(guān)。miR-132 可能導(dǎo)致重度抑郁癥 (MDD) 和心血管疾病并發(fā)，而抑制 miR-132 則會增加 BDNF 水平。

另一個重要方面是這些 miRNA 作為潛在“靶點(diǎn)”的實(shí)用性。這種方法被稱為 antagomir 概念，其中 miRNA 盡管目前作為診斷、預(yù)后或治療的生物標(biāo)志物，但也可用作拮抗劑的靶點(diǎn)。

microRNA的功能與抑郁癥的病理生理機(jī)制相關(guān)，過表達(dá)的miRNA會沉默下游靶標(biāo)。反義技術(shù)，特別是antagomir（膽固醇偶聯(lián)的2-O-甲基RNA反義寡核苷酸），可以選擇性地抑制病理性豐富的miRNA，并靶向各種疾病模型中的異常miRNA表達(dá)，從而促進(jìn)抑郁癥的靶向治療，并進(jìn)一步闡明microRNA在抑郁癥中的作用。

此外，納米粒子代表著當(dāng)前和未來應(yīng)用的重要途徑。根據(jù)Bui Duc Tri的研究，納米粒子（例如GABA納米粒子）在治療重度抑郁癥方面具有多種作用機(jī)制。GABA納米粒子釋放的GABA被GABA-T快速消耗，同時足以增強(qiáng)腸道中GABA能通路的活性。這一初步證據(jù)支持激活腸腦軸是GABA納米粒子治療重度抑郁癥的可能機(jī)制。

何曉烈等的研究表明，負(fù)載姜黃素和地塞米諾的固體脂質(zhì)納米?？梢蕴岣適RNA蛋白表達(dá)水平和成熟神經(jīng)元標(biāo)志物的蛋白表達(dá)，并促進(jìn)多巴胺和去甲腎上腺素的釋放，從而在重度抑郁癥的治療中表現(xiàn)出抗抑郁作用。這些研究強(qiáng)調(diào)了miRNA在重度抑郁癥治療中的重要作用。

應(yīng)特別關(guān)注抑郁癥患者的血脂狀況，因?yàn)橐阎脱蹇偰懝檀?、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇水平與自殺傾向相關(guān)。這種關(guān)聯(lián)歸因于細(xì)胞膜上的膽固醇濃度，研??究表明，細(xì)胞膜上膽固醇濃度降低與5-HT受體密度降低相關(guān)。

這項(xiàng)研究存在一些值得承認(rèn)的局限性。首先，研究對象規(guī)模相對較小，僅包含10名確診為重度抑郁癥的患者和8名健康對照者。此外，本次基因解碼并未將重度抑郁癥患者劃分為具體的疾病亞型（例如，伴有精神病性因素的重度抑郁癥或伴有憂郁性因素的重度抑郁癥），從而將研究結(jié)果的分類限定在寬泛的重度抑郁癥類別中。

發(fā)現(xiàn)與疾病發(fā)展相關(guān)的有效生物標(biāo)志物有助于準(zhǔn)確診斷抑郁癥。為了探討將生物標(biāo)志物納入針對抑郁癥患者和高危人群開展的一系列臨床試驗(yàn)，理想的生物標(biāo)志物應(yīng)具備以下特征：血清水平可檢測，以及在體液中具有構(gòu)象和熱穩(wěn)定性。

由于重度抑郁癥（MDD) 的發(fā)生和發(fā)展涉及多種非神經(jīng)系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)疾病，因此可將其視為一組高度異質(zhì)性的疾病。MDD 的異質(zhì)性病因?qū)χ委熜Ч兄苯佑绊?，這是重度抑郁癥（MDD) 治療方法中強(qiáng)調(diào)的一個方面。若干重度抑郁癥（MDD) 亞型被認(rèn)為與常規(guī)療法耐藥性有關(guān)。重度抑郁癥( MDD) 的診斷標(biāo)準(zhǔn)尚不明確，特別是難治性抑郁癥 (TRD) 和部分反應(yīng)性抑郁癥 (PRD)  。這些標(biāo)準(zhǔn)可能與其他疾病有關(guān)，例如內(nèi)分泌或代謝疾病。佳學(xué)基因解碼的研究確定了兩種與患者內(nèi)分泌特征相關(guān)的重度抑郁癥（MDD) 通路。之前發(fā)表的多篇論文報道了甲狀腺信號通路參與重度抑郁癥的發(fā)病機(jī)制，但最近發(fā)表的論文中只有少數(shù)將該通路與 miR 聯(lián)系起來。本文確定了與兩種 miR 類型相關(guān)的甲狀腺信號通路的五個靶基因：HDAC 、ATP2A2、ESR1、RXR alpha和EP300。對 HDAC、ATP2A2 和 ESR1 的研究高度支持它們參與重度抑郁癥（MDD) 發(fā)病機(jī)制和治療反應(yīng)。表觀遺傳機(jī)制已將 HDAC 證實(shí)為應(yīng)激性重度抑郁癥的主要因素，但也是治療反應(yīng)的主要因素。佳學(xué)基因解碼的結(jié)果與文獻(xiàn)中關(guān)于 HDAC 的數(shù)據(jù)重疊。 ATP2A2 基因突變是 Darier 病的特異性突變，Darier 病是一種遺傳性疾病，其特征是與神經(jīng)精神癥狀相關(guān)的皮膚病變，主要表現(xiàn)為重度抑郁癥（30%） 。佳學(xué)基因解碼的患者之前均未被診斷出患有 Darier病，但在本次基因解碼中， ATP2A2 是與甲狀腺信號通路相關(guān)的靶基因之一，同時也與神經(jīng)退行性疾病通路相關(guān)，這表明這兩條通路在重度抑郁癥的發(fā)病機(jī)制中存在聯(lián)系。在實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭校延嘘P(guān)于這兩條通路相互關(guān)聯(lián)的間接證據(jù)被報道，但在人類中尚未發(fā)現(xiàn)[ 70、71 ] 。佳學(xué)基因解碼推測，本次基因解碼中關(guān)于這兩條途徑相互關(guān)系的發(fā)現(xiàn)是首次在人類中報道的。

ESR 家族基因已被證實(shí)與人類重度抑郁癥相關(guān)，尤其值得關(guān)注的是 ESR2 與妊娠女性重度抑郁癥的關(guān)聯(lián) 。在佳學(xué)基因解碼的研究中， ESR1 和 ESR2與兩種miR 在沒有妊娠的情況下的催乳素分泌途徑相關(guān)。此前尚未有報道稱 hsa-miR- 574-3p所鑒定的甲狀腺信號通路中的 RXR alpha 與重度抑郁癥相關(guān)，因此，佳學(xué)基因解碼沒有數(shù)據(jù)來比較佳學(xué)基因解碼的結(jié)果。佳學(xué)基因解碼僅報告了其在重度抑郁癥患者中的存在情況。

文獻(xiàn)中有兩篇論文將 EP300 與重度抑郁癥聯(lián)系起來，其中一篇也存在于 Rubinstein-Taybi 綜合征中，而佳學(xué)基因解碼的患者中并不存在這種癥狀。

此前， Hedgehog 信號通路在重度抑郁癥中的研究較少，該通路被認(rèn)為與導(dǎo)致未來抑郁癥的神經(jīng)發(fā)生缺陷有關(guān)，或被用作MDD 的預(yù)測性生物標(biāo)志物 。在精神分裂癥患者的文獻(xiàn)中，僅有一篇論文將 HHAC 基因與重度抑郁癥（MDD) 聯(lián)系起來，這表明重度抑郁癥（MDD) 可能是精神分裂癥的一種非典型形式，而SMURF2 此前尚未被報道為重度抑郁癥（MDD) 相關(guān)基因。

綜上所述，這組 miRNA，即重度抑郁癥的“miRNome”，涵蓋了多種在重度抑郁癥患者血漿中表現(xiàn)出定量變異的 miRNA。miRNome 之所以得名，是因?yàn)槿祟惢蚪M（miRbase v22 數(shù)據(jù)庫）注釋了大約兩千個獨(dú)特的 miRNA，其中大多數(shù)在大腦中表達(dá)，其中一些具有大腦特異性功能。這些發(fā)現(xiàn)支持了以下理論：壓力和創(chuàng)傷可能會破壞 miRNA 的調(diào)控功能，而這些功能對于維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要。

本次基因解碼重點(diǎn)關(guān)注了一組 miRNA（hsa-miR-874-3p、hsa-miR-574-3p、hsa-miR-451a、hsa-miR-93-3p、hsa-let-7d-5p、hsa-miR-125a-5p、hsa-miR-132-3p、hsa-miR-141-3p、hsa-miR-140-5p、hsa-miR-376a-3p、hsa-miR-423-3p），這些 miRNA 在研究組中表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異，其他研究也證實(shí)了這一結(jié)果。然而，仍需進(jìn)一步研究以全面定制和評估這些生物標(biāo)志物，并逐步將其整合到抑郁癥患者血清學(xué)評估的檢測元素組中。

本次基因解碼從理論到實(shí)踐，其關(guān)鍵發(fā)現(xiàn)包括將分子醫(yī)學(xué)血液檢測納入重度抑郁癥患者的治療的必要性。這包括為實(shí)驗(yàn)室提供RT-PCR設(shè)備、培訓(xùn)醫(yī)護(hù)人員、引入miRNA診斷和監(jiān)測方案、將特定miRNA與抑郁癥亞型聯(lián)系起來，以及使用拮抗劑（antagomir）療法進(jìn)行靶向治療。此外，研究還推薦了注重個性化醫(yī)療實(shí)踐的新型健康項(xiàng)目。

5.基因解碼基因檢測對重度抑郁癥的診斷和治療的幫助作用

本次基因解碼成功鑒定出一“束”miRNA，主要以 hsa-miR-874-3p、hsa-let-7d-5p 和 hsa-miR-93-3p 為代表，這些 miRNA 在研究組中重度抑郁癥 (MDD) 患者中顯著上調(diào)。這些發(fā)現(xiàn)凸顯了 hsa-miR-874-3p、hsa-let-7d-5p 和 hsa-miR-93-3p 作為重度抑郁癥（MDD) 真正血漿生物標(biāo)志物的潛力，表明它們在該疾病的病理生理學(xué)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。

佳學(xué)基因解碼的研究結(jié)果強(qiáng)調(diào)了將這些miRNA納入臨床實(shí)踐的標(biāo)準(zhǔn)化方案的必要性，并強(qiáng)調(diào)了它們在MDD患者診斷和治療隨訪中的潛在效用。這種標(biāo)準(zhǔn)化可以為更精準(zhǔn)、更個性化的MDD管理方法鋪平道路，最終改善患者的治療效果。

然而，這些生物標(biāo)志物的前景也需要進(jìn)一步研究。未來的研究應(yīng)側(cè)重于驗(yàn)證這些 miRNA 在不同人群和臨床環(huán)境中的臨床適用性。此外，還需要進(jìn)行詳細(xì)的評估，以探索這些生物標(biāo)志物在個性化治療策略中的潛力，確保能夠根據(jù)個體患者獨(dú)特的生物學(xué)特征定制治療干預(yù)措施。

綜上所述，hsa-miR-874-3p、hsa-let-7d-5p 和 hsa-miR-93-3p 代表了重度抑郁癥的有前景的生物標(biāo)志物。通過標(biāo)準(zhǔn)化的診斷和治療方案，將它們整合到臨床實(shí)踐中，對于提高重度抑郁癥管理的精準(zhǔn)度和有效性具有重要意義。進(jìn)一步的研究對于充分發(fā)揮它們的潛力并確定其在個性化醫(yī)療中的作用至關(guān)重要。